牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用

摘要：

目的 建立牛血清IgG(bovine immunoglobulin G,BIgG)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法.方法 用BIgG-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIgG单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIgG抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度.应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIgG抗原残留量.结果 建立了以3EI2D2为包被单抗(8.0 μg/ml,100μl/孔),4A2GIBI-HRP为酶标抗体(1∶1000稀释,100μl/孔)定量检测BIgG的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3～9.6 ng/ml,R2＞0.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1％～108.5％之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均＜10％;37℃放置3和6d的稳定性均＞90％;该试剂样品与BIgG可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应.9批牛血清中BIgG含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIgG均明显去除,但BIgG占牛血清残留量(BSA+ BIgG)的比例却明显上升.结论 建立的BIgG抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测.

关键词：牛血清IgG、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA

所属期刊栏目：29

分类号：R392-33

在线出版日期：2016-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：528-532,537