A型肉毒毒素轻链蛋白的表达及纯化
目的 构建A型肉毒毒素轻链表达载体重组质粒,在大肠埃希菌中表达后,利用金属螯合层析柱纯化.方法 以pGEM-BoNT/AL轻链质粒为模板,PCR扩增BoNT/AL基因,克隆至表达载体pET-28(a)中,构建重组质粒pET-28(a)-BoNT/AL,转化E coli BL21(DE3),分别于37、30、25℃IPTG诱导表达,表达产物经Chelating Sepharose 4Fast Flow(Cu2+)层析柱纯化,纯化产物经尿素梯度复性.结果 质粒pET-28(a)-BoNT/AL经酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,主要以包涵体形式存在,37℃诱导表达量最高,占菌体沉淀总蛋白的41%;包涵体经2% Trition-X100和2 mol/L尿素洗涤后,可去除部分杂蛋白,8 mol/L尿素能溶解大部分包涵体;经再次浓缩后,蛋白浓度可达89μg/m1,纯度达90%.结论 成功克隆及表达了BoNT/A轻链基因,为制备抗BoNT/A轻链单链抗体以及研究肉毒中毒机制和治疗方案奠定了基础.
A型肉毒毒素轻链、大肠埃希菌、基因表达、纯化
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R378.8+3;Q786(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
2016-07-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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