牛副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶蛋白在杆状病毒中的表达
目的 在杆状病毒中表达牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type-3,BPIV-3)血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN).方法 提取BPIV-3 BN-1株RNA,设计特异性引物扩增HN全长ORF,将其克隆至杆状病毒供体载体pFastBacHTA中,获得重组供体质粒pFastBac-HN.将pFastBac-HN转化至感受态细胞E.coli DH10Bac,制备穿梭质粒Bacmid-HN.将纯化的Bacmid-HN经脂质体转染至Sf21昆虫细胞,拯救重组杆状病毒,并进行Western blot鉴定.结果 经PCR及测序鉴定证明,HN基因重组供体质粒pFastBac-HN及穿梭质粒Bacmid-HN构建正确.利用Sf21昆虫细胞成功拯救重组杆状病毒,连续传代扩增3代的病毒滴度为2×108 CPE/ml.重组HN蛋白的相对分子质量约70 000,可与BPIV-3阳性血清发生特异性反应.结论 在杆状病毒表达系统中成功表达了BPIV-3重组HN蛋白,为BPIV-3的诊断及疫苗效力评价奠定了基础.
牛副流感病毒3型、血凝素-神经氨酸酶蛋白、杆状病毒、真核细胞、基因表达
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S852.65+3;Q786(动物医学（兽医学）)
黑龙江省大学生创新创业训练计划项目201510223020;黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目YJSCX2015-Y19;黑龙江省农垦总局攻关课题HNK125B-1108A;“十二五”农村领域国家科技计划课题2012BAD12B03-3.
2016-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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