腺苷酸激酶4慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定.方法 从HepG2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染HEK293T细胞,包装慢病毒;将慢病毒原液进行10倍系列稀释(10-1～10-4),感染HEK293T细胞,检测病毒滴度;慢病毒感染HepG2细胞,Western blot法检测AK4蛋白的表达水平.结果 重组质粒LV5-AK4经测序鉴定证明构建正确,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为5×108 TU/ml.试验组HepG2细胞中AK4蛋白的表达水平显著高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.01).结论 成功构建了携带AK4基因的重组慢病毒过表达质粒,为进一步研究低氧应激细胞中AK4的功能及其分子作用机制奠定了基础.

关键词：腺苷酸激酶4、慢病毒、过表达

所属期刊栏目：29

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：黑龙江八一农垦大学学成、引进人才科研启动计划资助课题1253HQ013;黑龙江省教育厅海外学人科研资助项目1253HQ013.

在线出版日期：2016-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：248-251