克罗诺杆菌IbpA蛋白的表达、纯化及其免疫原性
目的 表达并纯化克罗诺杆菌IbpA蛋白,检测其免疫原性.方法 提取克罗诺杆菌菌株CMCC45402的基因组,经PCR获得ibpA基因片段,连接至表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET30a(+)-ibpA.将重组质粒转化E.coli BL21 (DE3)菌株,用不同终浓度的IPTG(0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mmol/L)分别于30和37℃诱导表达不同时间(2.5、4、5h),进行SDS-PAGE及Western blot分析.表达产物经Ni凝胶亲和层析纯化后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,共2次,末次免疫1周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测血清效价.同时检测热激对IbpA蛋白表达水平的影响.结果 重组质粒pET30a(+)-ibpA经双酶切鉴定证明构建正确.最佳IPTG诱导终浓度为0.2 mmol/L,最佳诱导温度为30℃,最佳诱导时间为5h.诱导表达产物相对分子质量约24 000,主要以可溶性形式存在,可与抗His-Tag单克隆抗体特异性结合;纯化蛋白的纯度可达96％;小鼠免疫血清效价均可达1:25 000以上.用小鼠血清可检测到热激后克罗诺杆菌IbpA的表达.结论 本实验成功构建了ibpA基因的高效原核表达系统,获得了高纯度重组蛋白,制备了高效价抗血清,为后续ibpA基因和克罗诺杆菌热抗性关系的研究奠定了基础.
克罗诺杆菌、IbpA蛋白、原核表达、纯化、免疫原性
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R378.2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
重大新药创制专项课题1040871310101.
2016-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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