UT-7/EPO细胞培养条件的优化及复壮
目的 使复苏后处于衰亡状态的UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态,并优化其生长密度.方法 通过更换不同培养基(改良的RPMI 1640、DMEM和IMDM培养基)、调整血清浓度(10％、15％和20％)、改变生长因子加量(1、3、5 U/ml)及将小鼠腹腔细胞作为饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养,对UT-7/EPO细胞进行复壮.对恢复正常生长状态后的UT-7/EPO细胞,利用CCK-8法绘制细胞生长曲线,并根据生长曲线通过梯度密度培养确定UT-7/EPO细胞在不同培养器皿(48、24、12、6L板及25 cm2细胞培养瓶)中的最适培养密度.将传代后第2天处于对数生长期的UT-7/EPO细胞冻存及复苏传代3次后,连续培养9 d,检测复壮后UT-7/EPO细胞的初步稳定性.将复壮后UT-7/EPO细胞分别用人源STR试剂及小鼠细胞STR位点进行鉴定.结果 更换培养基、改变血清和生长因子加量均不能使衰亡的UT-7/EPO细胞的生长状态有明显改善;饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养可使UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态;获得了UT-7/EPO细胞在不同培养器皿中的最适培养密度.复苏后的细胞生长状况良好,与未冻存前的生长状态及活力相当.人源STR位点检测结果显示,复壮后的UT-7/EPO细胞STR图谱均为单个或2等位基因峰,无其他人源细胞的污染;小鼠STR位点检测结果显示,复壮后的细胞未发现饲养细胞的污染.结论 饲养细胞能够有效地使UT-7/EPO细胞复壮;最适的细胞生长密度能有效地使细胞维持在稳定、良好的生长状态.
UT-7/EPO细胞、培养条件、优化、复壮
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Q2-33
北京市自然科学基金资助项目7132144.
2016-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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