C-GPC3蛋白的表达及人源GPC3抗体的筛选

摘要：

目的 构建C-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)基因真核表达质粒,表达C-GPC3蛋白,并通过哺乳动物展示型全人源scFv抗体库筛选GPC3抗体.方法 通过PCR从含有全长GPC3的质粒中扩增C-GPC3基因,将其克隆至p3457-his载体中,构建重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,转染293T细胞,对C-GPC3蛋白的表达进行Westem blot鉴定.将质粒p3457-C-GPC3瞬时转染293E细胞,获得C-GPC3蛋白,采用Ni亲和柱纯化后,进行FITC标记.以本课题组构建的哺乳动物展示型全人源scFv抗体库为起始文库,FITC-C-GPC3抗原按照10、2和0.8 nmol/L的浓度梯度,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例约为0.1％的阳性细胞.结果 重组表达质粒p3457-C-GPC3经菌液PCR和测序鉴定证明构建正确;瞬时转染293T和293E细胞均可表达相对分子质量约为25 000的C-GPC3蛋白;获得了可与C-GPC3结合的阳性率约为0.1％的阳性细胞.结论 成功构建了重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,并从哺乳动物展示型全人源scFv抗体库中筛选出了阳性细胞,为后期全人源GPC3抗体的构建和表达奠定了基础.

关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、C-末端、293E细胞、哺乳动物展示型抗体库、scFv、流式细胞术、分选

所属期刊栏目：29

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助81272701.

在线出版日期：2016-03-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：13-17,22