保健食品中3种病原菌多重PCR快速检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立快速检测保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR(multiplex PCR,mPCR)方法,并进行验证及初步应用.方法 以提取的各菌株基因组DNA为模板,利用GenBank中登录的沙门菌invA、志贺菌ipaH、金黄色葡萄球菌nuc基因序列设计引物,采用优化后的反应体系及确定的反应条件进行PCR扩增,扩增产物经3％琼脂糖凝胶电泳鉴定,对建立的方法进行特异性、敏感性、重复性验证.将沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌等量混合后,进行10倍系列稀释,加至10批无病原菌蛋白质粉和10批无病原菌减肥茶样品匀浆中,用建立的方法进行PCR扩增,并与GB常规生化检测结果进行比较.结果 确定mPCR反应体系为:10×PCR buffer 2.0μl,dNTPs 2.5μl,Taq DNA酶0.6μl,上下游引物各1.5μl,Mg2+1.0μl,补加ddH2O至25μl.10株细菌中,沙门菌、2株志贺菌、金黄色葡萄球菌扩增结果为阳性,其他菌株为阴性,invA、ipaH、nuc基因扩增片段与GenBank登录的序列同源性分别为99％、99％和100％;沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌菌株均能在101～ 105 CFU/ml浓度时扩增出特异性目的条带;5个浓度混合菌液扩增产物均可见特异性反应条带.该方法扩增出10批人工添加细菌蛋白质粉和10批人工添加细菌减肥茶中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌的特异性基因片段,检出限均为102 CFU/ml,与GB常规生化检测结果一致.结论 建立的保健食品中沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌mPCR检测方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可满足不同检验机构快速、准确检测保健食品中多种病原微生物样品的实际需要.

关键词：保健食品、沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、多重聚合酶链式反应、验证

所属期刊栏目：28

分类号：R373.2+4;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2015-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1219-1222