狂犬病病毒磷蛋白重组人5型腺病毒的构建及鉴定
目的 构建表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)BD06株磷蛋白(phosphoprotein,P)的重组人5型腺病毒,并进行鉴定.方法 质粒pMD 18-T-BD06P经双酶切后,获得完整的P蛋白基因,将其克隆至腺病毒表达系统穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA,构建重组穿梭质粒pacAd5CMV-BD06P,与骨架质粒pacAd5 9.2-100经Pac Ⅰ酶切线性化后,共转染HEK293AD细胞,经同源重组,获得表达RABV P蛋白的重组人5型腺病毒rAd5-BP.采用Kaber法计算rAd5-BP滴度,RT-PCR、Western blot、直接免疫荧光方法(direct immunofluorescence assay,dFA)检测P蛋白基因在HEK-293AD细胞的转录及表达水平.以107 TCID50 rAd5-BP肌肉注射免疫昆明小鼠,14 d后,经尾静脉采血,分离血清,IFA法检测抗RABVP蛋白抗体及其反应活性.结果 经酶切及测序鉴定证明重组穿梭质粒pacAd5CMV-P构建正确;重组腺病毒rAd5-BP滴度可达108 TCID50/ml,能够介导P蛋白在HEK293AD细胞中的转录及表达,接种小鼠后可刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性.结论 成功构建了RABVBD06株P蛋白重组人5型腺病毒,该病毒能够介导P蛋白在小鼠体内有效表达,刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性,为进一步研究RABV P蛋白在病毒感染过程中的作用奠定了基础.
狂犬病病毒、磷蛋白、人5型腺病毒
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R373.9;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家高技术研究发展863计划2011AA10A212.
2015-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1023-1027
