过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响
目的 探讨过氧化氢酶(catalase,CAT)过表达对α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T1内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响.方法 构建pEGFP-CAT真核表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组表达质粒及空载体转染至BERP35T1细胞中,经G418筛选出具有抗性的细胞株.Real-time PCR和Western blot法检测BERP35T1细胞中CAT基因mRNA转录和CAT蛋白表达水平;免疫细胞化学法、MTT法、细胞划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测CAT过表达对BERP35T1细胞DNA氧化损伤水平(8-OHdG水平)、增殖(细胞存活率)、迁移能力(细胞迁移距离)和锚着独立性(软琼脂克隆形成率)的影响.结果 重组表达质粒pEGFP-CA T经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,获得了CAT稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35T1-CA T-7.空白对照BERP35T1、BERP35T1-pEGFP和BERP35T1-CA T-7细胞中CAT基因mRNA转录水平分别为0.90±0.23、1.00±0.12和2.91±0.41,CAT蛋白相对表达水平分别为0.97±0.11、1.00±0.00和5.72±1.28,8-OHdG表达水平分别为1.65×10-2、1.60×10-2和8.95×10-3,细胞存活率分别为(95.33±4.26)％、(100.00±8.29)％和(61.63±3.08)％,细胞迁移距离分别为(150.68±9.98) μm、(115.02±30.73) μm和(44.25±10.53) μm,细胞软琼脂克隆形成率分别为(2.50±0.02)‰、(2.10±0.02)‰和(0.70±0.02)‰.结论 CAT过表达可能通过降低DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞的增殖、转移和锚着独立生长能力等恶性表型.
过氧化氢酶、过表达、α粒子、肺癌、DNA氧化损伤
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R734.2;R73-36(肿瘤学)
国家自然科学基金资助项目81000862.
2015-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1011-1017
