血管内皮生长因子化学发光免疫测定试剂盒的研制及验证
目的 研制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)化学发光免疫测定试剂盒,并对该试剂盒进行验证.方法 以试剂盒的技术指标和血清检测结果为参考依据,建立检测方法,确定检测范围,并对包被抗体(1∶500、1∶1000和1∶2000倍稀释)及酶标抗体浓度(1∶3000、1∶5000、1∶6000和1∶8 000倍稀释)、包被温度(室温和4℃)、封闭液成分(1%小牛血清、1%和0.5%牛血清白蛋白)及干燥方法(超净台吹干和使用真空干燥机进行干燥)进行优化;同时对试剂盒的线性、检出限、精密性、准确度、特异性及热稳定性进行验证;采用本试剂盒对139例非肿瘤人群和100例肿瘤患者的血清样本进行初步检测.结果 方法的最佳检测条件为:包被抗体浓度为1∶1000,酶标抗体浓度为1∶3000,对血清样本的检测范围为6.25~ 800 pg/ml,最佳包被浓度为4℃,最佳封闭液成分为0.5%牛血清白蛋白,最佳干燥方法为真空干燥法.试剂盒线性相关系数r>0.99,校准曲线各点偏差的绝对值<10%,最低检出限≤3.125 pg/ml,空白检出限≤3.125 pg/ml,批内差异<5%,批间差异<7%,回收率为85% ~ 99%;特异性检验结果为本试剂盒对EGF、FGF-2、PDGF-AA、PlGF-1、PlGF-2、HGF、TNF-α、TNF-β检测的交叉反应率≤0.52%;经37℃保存3、7d后,试剂盒线性相关系数r>0.99,空白检出限≤3.125 pg/ml,批内差异<8%,回收率为80% ~ 82%.139例非肿瘤人群和100例肿瘤患者的血清样本中VEGF的中位水平(M)分别为44.6和83.4 pg/ml.结论 本研究开发的试剂盒具有较高的准确性、灵敏性、特异性,适用于血清VEGF的临床检测,具有较好的临床应用前景.
血管内皮生长因子、化学发光免疫分析
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R392-33
2015-10-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
938-942,946