慢病毒介导siRNA对大鼠脊髓组织细胞外信号调节激酶1/2及核因子E2相关因子2基因的影响

摘要：

目的 评价慢病毒介导细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)-siRNA及核因子(nuclear factor,NF)E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)-siRNA进入大鼠局部脊髓组织的转染效果.方法 采用NYU撞击法构建SD大鼠脊髓损伤模型(模型组),使用微量注射器将含荧光慢病毒载体(LV-Nrf2-RNAi和LV-ERK1/2-RNAi)稀释液注射至其脊髓T10水平背侧深约0.8mm处,荧光显微镜下观察不同时间点(12h、24 h、72 h、7d及14 d)转染效果.以只切除椎板,不打击脊髓的大鼠作为假手术组,在模型组和假手术组中同时设转染组和未转染组.取大鼠脊髓组织,采用RT-PCR及Western blot法检测转染后7d时ERK1/2及Nrf2基因mRNA转录及蛋白表达水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脊髓组织在慢病毒转染后各时间点均有较强的荧光表达,病毒转染7d以内,荧光强度与时间呈正相关,在转染7d后达到高峰.转染7d后,假手术组与模型组中ERK1/2及Nrf2基因mRNA转录及蛋白表达水平均较未转染组明显降低(P均＜0.05).结论 慢病毒介导siRNA转染大鼠脊髓组织,能够有效沉默ERK1/2及Nrf2基因的表达.

关键词：慢病毒、RNA干扰、细胞外信号调节激酶1/2、核因子E2相关因子2基因、脊髓组织

所属期刊栏目：28

分类号：Q812;Q291(生物工程学(生物技术))

资助基金：云南省第一人民医院奥新基金项目资助2014BS008.

在线出版日期：2015-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：912-917