大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸
目的 为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺.方法 将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体pET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒pET-28a-SA MS.将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21 (DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(pET-28a-SA MS.采用混合悬浮培养法,利用含有SA MS基因的重组大肠埃希菌BL21(pET-28a-SA MS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化.结果 经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒pET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(pET-28a-SA MS)构建正确.大肠埃希菌BL21(pET-28a-SA MS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5h,添加5％甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/LMgCl2·6H2O、30 mmol/L L甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系.最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L.结论 本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径.
大肠埃希菌、酿酒酵母、偶联、S-腺苷甲硫氨酸
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Q939.97(微生物学)
福建省自然科学基金项目2010J01212;厦门市海洋渔业局项目14CZP03HJ04.
2015-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
729-735
