b型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立
目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以Hib多糖一酪胺结合物(PRP-Ty)作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方法.采用棋盘法确定最佳包被多糖抗原浓度及Hib抗血清稀释倍数,绘制标准曲线,并确定最低检测限;对建立的方法进行批内和批间精密性验证;取Hib发酵液,在培养温度、接种量等因素相同的情况下,分别将培养液初始pH调至6.0±0.02、7.0±0.02和8.0±0.02,培养不同时间取样,采用建立的方法检测培养液内PRP含量.结果 PRP-Ty的最佳包被浓度为1.25 μg/ml,Hib抗血清的最佳稀释倍数为300倍.该方法检测的线性范围为6.25～ 200 ng/ ml,最低检测限为6.25 ng/ ml,回归方程为y=-23.12x+99.62,R2=0.996.采用该方法分别重复检测3次高浓度(200 ng/ml)和低浓度(20 ng/ml)PRP多糖的变异系数(CV)分别为1.608％和3.344％;采用该方法及传统化学检测法分别检测6次同一批Hib成品分装疫苗的多糖,该方法检测结果的CV值为5.75％,传统化学法检测结果的CV值为1.98％,均符合要求;该方法检测不同初始pH培养液培养的Hib发酵液,培养时间为8h左右时,PRP产量最高;当初始pH为8.0±0.02时,培养液内PRP含量增长最快,所达到的浓度最高.结论 建立了Hib多糖间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度较高,精密性良好,可应用于Hib多糖含量的定量检测.
b型流感嗜血杆菌、多糖、间接竞争ELISA
28
R378.4+1;R393-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
科技部国际合作项目Sabin IPV关键技术研究2010DF32890;医学生物学研究所科技重大专项2014IMBZDZX02.
2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
623-627
