猪B型多杀性巴氏杆菌铁摄取调节基因Fur的生物信息分析及其原核表达
目的 对猪B型多杀性巴氏杆菌铁摄取调节基因Fur进行生物信息分析,并检测原核表达产物的抗原性.方法 以猪B型多杀性巴氏杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增Fur基因,克隆至载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-6p-1-Fur.利用生物信息学方法结合网络数据库测序分析Fur基因同源性、蛋白质理化特性、蛋白质结构并进行同源建模.将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经透析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pGEX-6p-1-Fur经双酶切鉴定构建正确.Fur基因全长432 bp,编码144个氨基酸,与禽Pm70菌株的Fur基因同源性达99.8％,与嗜血杆菌属亲缘较近;Fur蛋白空间结构与铁吸收调节蛋白2w57.1.A相似性较高,Fur蛋白为酸性脂蛋白,Fur蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,107-117位氨基酸区域作为抗原表位可能性较大,且Fur无跨膜区与信号肽,是相对成熟稳定的蛋白.以2w57.1.A为模板构建了可靠的三维结构分子模型.重组蛋白GST-Fur相对分子质量约44 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的33％,纯化后纯度达92％,重组蛋白GST-Fur可与多杀性巴氏杆菌制备的血清发生特异性结合.结论 于E coli中成功表达了重组蛋白GST-Fur,构建了可靠的三维结构模型,为进一步研究Fur蛋白功能及毒力作用机制奠定了基础.
多杀性巴氏杆菌、铁摄取调节蛋白、生物信息、基因表达、抗原性
28
S855.1+2;Q-33(动物医学（兽医学）)
大学生创新创业训练计划项目201310223006.
2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
587-592,597
