树鼩白细胞介素-6的原核表达及其分子特征
目的 原核表达树鼩(tree shrew,ts)白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)基因,并分析tsIL-6蛋白分子特征.方法 以人、猴、啮齿类动物等IL-6 mRNA的共有序列作为查询序列,从树鼩cDNA数据库中进行本地blast,获得预测tsIL-6核苷酸序列,将其翻译成氨基酸序列,用MEGA 6软件进行核酸序列和氨基酸序列比对,绘制进化树.参考预测IL-6基因序列设计引物,PCR扩增IL-6基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a(+)-IL-6;转化感受态E.coli BL21(ED3),IPTG诱导表达,重组蛋白经14 KD透析膜梯度透析纯化;利用蛋白质在线数据库expasy进行蛋白质结构同源建模,并用SignalP sever预测tsIL-6的信号肽序列,经模板与预测模型的结构拟合来预测树鼩IL-6的gp130结合位点.结果 tsIL-6核苷酸和氨基酸序列与高等灵长类动物有较高的同源性;重组表达质粒pET-28a(+)-IL-6经双酶切鉴定证明构建正确;重组表达蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后可见单一目的条带,浓度为0.2mg/ml;hIL-6和tsIL-6蛋白的空间结构较类似,tsIL-6的gp130结合位点Ⅱa位于A和C螺旋间,位点Ⅲa位于A和B螺旋的柔性链区及分子近C-端.结论 tsIL-6的核苷酸和氨基酸序列与高等灵长类动物具有较高同源性,成功构建的重组原核表达质粒pET-28a(+)-IL-6,为后续IL-6相关的病理研究奠定了基础.
树鼩、白细胞介素-6、原核细胞、基因表达、同源建模
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R392.11;Q786
云南省应用基础研究面上项目2011FZ209;国家自然科学基金面上项目81373142;北京协和医学院研究生创新基金项目2013-1001-12.
2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
557-563
