沙门菌PCR-ELISA检测方法的建立
目的 建立沙门菌PCR-ELISA检测方法,并进行验证.方法 根据沙门菌invA基因设计PCR-ELISA引物及探针,进行PCR扩增、核酸杂交及ELISA检测,对变性反应条件、杂交探针浓度、杂交时间和温度及显色时间进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行敏感性、特异性及重复性验证.用建立的PCR-ELISA方法检测人工染菌的22批中药丸剂及27批液体乳中的沙门菌,并与PCR及GB4789方法进行比较.结果 150 mmol/L NaOH变性液可使核酸变性最彻底,50 pmol/ml地高辛标记探针为最适浓度,50℃60 min为最佳杂交时间和温度,最佳显色时间为50 min;阴性、阳性的阈值为0.265.该方法最低检测限为0.5 pg/μl,灵敏度高;能针对性地扩增沙门菌的特异性片段,检测特异性强;检测结果的批内、批间变异系数均小于10％,重复性较好.人工染菌的22批中药丸剂和27批液体乳的PCR-ELISA方法检测阳性率明显高于PCR法,与GB4789方法检测阳性率基本一致.结论 优化后的PCR-ELISA方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可快速检测食品、药品中的沙门菌.
沙门菌、聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验
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R378.2+2;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
540-543
