实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数

摘要：

目的 建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数.方法 以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线.提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数.结果 分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6％和91.8％,具有良好的特异性.随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象.结论 成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法.

关键词：实时定量PCR、转基因、CHO细胞、单克隆抗体、轻链、重链、基因拷贝数

所属期刊栏目：28

分类号：Q789;R392-33(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：523-527