重组2型腺相关病毒肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因治疗制剂的质量分析
目的 对重组2型腺相关病毒肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(recombinant adeno-associated virus 2 encoding tumor necrosis factor-related apoptosis-induced ligand,rAAV2-TRAIL)基因治疗制剂进行质量分析,并针对其关键质量属性建立质控方法.方法 采用PCR法对rAAV2-TRAIL基因治疗制剂中插入的启动子CAG和目的基因TRAIL进行鉴别;在腺病毒(Ad5)的辅助下,将rAAV2-TRAIL体外感染293T细胞后,采用ELISA法检测培养上清中目的蛋白TRAIL的表达量,检测rAAV2-TRAIL对神经胶质瘤U251细胞的体外杀伤活性;设计引物及探针,采用Q-PCR法检测rAAV2-TRAIL基因治疗制剂中的rAAV2-TRAIL滴度、可能存在的复制型rcAAV滴度以及残余辅助病毒1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSVl)滴度.结果 启动子CAG和目的基因TRAIL的PCR鉴定结果与理论及理化对照品相符;rAAV2-TRAIL感染293T细胞48 h后,上清中TRAIL表达量为(0.36±0.18) ng/ml,RSD为50.0％;rAAV2-TRAIL体外作用于神经胶质瘤细胞U251,细胞生长相对抑制率为(26.6±3.75)％,RSD为14.1％;制剂中rAAV2-TRAIL滴度为(4.72×1011±0.52×1011) copies/m1,RSD为11.0％,rcAAV滴度为(2.49×107±0.18×107) copies/ml,RSD为7.2％,HSV1滴度为(6.02×106±0.51×106) copies/ml,RSD为8.5％.rAAV2-TRAIL/rcAAV为1.90×104,rAAV2-TRAIL/HSV1为7.84× 104.结论 建立的质控方法可用于rAAV2-TRAIL的质量控制,为该产品质量标准的建立奠定了基础,同时对以AAV为载体的基因治疗制剂的质量研究提供参考.
腺相关病毒、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、基因治疗、质量控制
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Q78;R730.53(基因工程（遗传工程）)
国家“863”计划课题2012AA020805.
2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
501-504,509
