耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化

摘要：

目的 原核表达耐甲氧两林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定.方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的me cAf基因片段,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-mecAf,经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pGEX-6p-mecAf经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5％,纯化后纯度达90％.结论 成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coii中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础.

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、青霉素结合蛋白2a、转肽酶区、原核细胞、基因表达

所属期刊栏目：28

分类号：R373.1+1;R186+.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：497-500