海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性
目的 原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶cDNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3'RACE和5'RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶cDNA序列的3 '端和5 '端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体pET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性.结果 经3 '端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因cDNA 3'端序列,再经5'RACE技术扩增获得约770 bp的cDNA 5'端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶cDNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30％,上清纯化后纯度可达95％;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用.结论 原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据.
海蚯蚓、丝氨酸蛋白酶、原核细胞、基因表达、抗肿瘤活性
28
R730.54(肿瘤学)
国家自然科学基金项目30901779;山东省自然科学基金项目ZR2009CM019;山东省高等学校科技计划项目J11LC52资助.
2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
488-492
