含人巨细胞病毒糖蛋白B中AD2位点Ⅰ的鞭毛融合蛋白在小鼠中的免疫应答

摘要：

目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)糖蛋白B(glycoprotein B,gB)中AD2位点Ⅰ(AD-2S1)在小鼠中的免疫效果.方法 将AD-2和4×AD-2S1核酸序列分别克隆至含有鞭毛蛋白的质粒pET42b-FljB中,构建表达载体pET/FljB-AD-2和pET/FljB-4×AD-2S1,转化大肠埃希菌Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达,收集FljB-AD-2的菌体裂解液上清及FljB-4×AD-2S1的菌体裂解液沉淀,经Superdex-200凝胶过滤层析纯化,根据蛋白含量及纯度配制无佐剂抗原(FljB-AD-2和FljB-4×AD-2S1)及含Al(OH)3佐剂抗原[FljB-AD-2+ Al(OH)3和FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3].用制备的抗原于第0和21d皮下免疫BALB/c小鼠,设PBS对照组,于2次免疫后1周,眼窝后穿刺采血,分离血清,ELISA法检测AD-2S1特异性IgG及IgG1和IgG2a水平,中和试验检测HCMV中和抗体水平.结果 纯化的FljB-AD-2抗原相对分子质量约54 000,纯度为88.2％,蛋白含量为0.91 mg/ml;纯化的FljB-4×AD-2S1抗原相对分子质量约50 000,纯度为96.8％,蛋白含量为0.45 mg/ml.与对照组相比,免疫组小鼠均产生不同水平的抗AD-2S1特异性IgG抗体,FljB-AD-2和FljB-AD-2+ Al(OH)3免疫组小鼠IgG水平较低,FljB-4×AD-2S1和FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3免疫组小鼠IgG水平较高,其中FljB-4×AD-2S1与FljB-AD-2免疫组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);FljB-4×AD-2S1可诱导小鼠产生IgG1和IgG2a两种抗体,但IgG2a水平较高,差异有统计学意义(P＜0.05),而FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3诱导小鼠产生的IgG1和IgG2a水平差异无统计学意义(P＞0.05);各免疫组小鼠血清中和抗体水平均不高于1∶4.结论 FljB-4×AD-2S1和FljB-AD-2均能诱导产生AD-2S1特异性IgG,却不能诱导小鼠产生补体非依赖性中和抗体.

关键词：巨细胞病毒、鞭毛融合蛋白、免疫原性

所属期刊栏目：28

分类号：R373.9;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2015-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：451-455