检测人血浆蛋白α1-蛋白酶抑制剂活性的弹性蛋白酶动态显色法的优化及其验证
目的 优化检测人血浆蛋白α1-蛋白酶抑制剂(α1-protease inhibitor,α1-PI)活性的弹性蛋白酶动态显色法,并进行验证.方法 以微量滴定板为载体,将不同浓度的α1-PI与特定量的猪胰弹性蛋白酶(poreine pancreaselastase,PPE)混合,测定剩余的弹性蛋白酶催化特定底物的强度,判定样品中α1-PI的含量,通过比较不同浓度酶和底物的组合中标准曲线的线性范围,确定最佳反应条件.对优化的动态显色法进行准确度、精密度验证,并确定标准曲线的线性范围.采用优化后的方法对α1-PI制备工艺进行监控,并筛选冻干配方.结果 PPE与底物的浓度选择分别为0.2 U/ml和1.2 mg/ml.该方法检测α1-PI的线性范围在2～ 14tμg/ml之间,r＞0.99.各浓度样品检测结果的CV均＜4％,回收率在99.4％ ～ 104.3％之间,准确性较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次的CV为1.8％,同一样品由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的CV为1.8％,重复性较好.纯化工艺过程中各样品比活均符合《欧洲药典》规定的＞0.7,总回收率为62.9％;筛选出可较好保护α1-PI活性的配方.结论 优化后的弹性蛋白酶动态显色法可用于工艺样品中α1-PI活性的检测.
动态显色法、α1-蛋白酶抑制剂、优化、验证
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O657.32;Q553(分析化学)
国家高技术研究发展计划863计划2013ACC001.
2015-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
406-410
