肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
目的 原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA),并制备多克隆抗体.方法 应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对PspA氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区(第33～109个氨基酸),选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒pGEX-4T-2和pET28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a(+)-pspa,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.分别纯化带有GST标签和His标签的PspA重组蛋白GST-PspA和His-PspA,以His-PspA作为免疫原,经背部多点免疫新两兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性.结果 两种重组表达质粒pGEX-4T-2-pspa和pET28a(+)-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-PspA和His-PspA相对分子质量分别约为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度约为95％,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1∶200 000,且特异性较好.结论 原核表达并纯化了肺炎链球菌PspA融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础.
肺炎链球菌表面蛋白A、原核细胞、基因表达、纯化、多克隆抗体
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R378.1+4;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2015-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
372-376,382
