人膜联蛋白A3的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达人膜联蛋白(annexin,ANX)A3(ANX A3),并进行纯化.方法 提取人胎盘样品总RNA,反转录建立cDNA文库,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增anx A3基因编码区全长,连接至克隆载体pEASY-Blunt上,测序鉴定.用primix extaq酶重新扩增anx A3基因,与表达载体pEASY-E1连接,构建重组表达质粒pEASY-anx A3,转化E.coli Transetta DE3,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经6×His纯化介质及Bio-Rad BioLogic DuoFlowChromatography Systems纯化后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定,阳性克隆可扩增出972 bp的目的片段,与NCBI中GenBank上报道的anx A3序列完全一致.纯化的重组蛋白相对分子质量约为36 000,可与鼠Anti 6×His-Tag单克隆抗体特异性结合,浓度为400 μg/ml.结论 成功构建了重组原核表达质粒pEASY-anxA3,并在E.coli Transetta DE3中表达了重组蛋白,为进一步研究ANX A3在哮喘病的起因和形成中的作用及机制奠定了基础.

关键词：膜联蛋白A3、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：28

分类号：Q257;Q786(细胞生理学)

资助基金：吉林省科技厅科技发展计划基金20090470.

在线出版日期：2015-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：364-367,371