钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白α、β亚基基因的克隆及其原核表达
目的 克隆钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)d、β亚基的基因序列,分别构建该蛋白的α和β亚基的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达.方法 PCR扩增钝顶螺旋藻APC基因(apc)序列,克隆至pGEM-Teasy载体中,测序分析插入片段的正确性.以克隆的apc基因为模板,分别扩增APC的α和β亚基的编码基因apcA和apcB,测序分析正确后,分别克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-apcA和pGEX-4T-apcB.将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21 (DE3)pLysS感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione SepharoseTM4Fast Flow树脂纯化,Bradford法测定纯化蛋白的浓度.结果 成功克隆了钝顶螺旋藻的APCα和β亚基的编码基因apcA和apcB,构建的重组质粒经测序证明构建正确,表达的融合蛋白α-APC-GST和β-APC-GST的相对分子质量均为43 000,其中α-APC-GST主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的32.1％,纯化后的蛋白纯度达85％,蛋白浓度为0.3 mg/ml;β-APC-GST主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的31.4％,纯化后的蛋白纯度达65.4％,蛋白浓度为0.1 mg/ml.结论 已成功克隆并在大肠埃希菌中表达了钝顶螺旋藻APC的α和β亚基.
钝顶螺旋藻、别藻蓝蛋白亚基、基因、原核表达
28
Q939.9;Q782(微生物学)
内蒙古自然科学基金2013MS0521;内蒙古自治区应用技术与研究开发资金计划;鄂尔多斯市科技创新基金.
2015-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
356-359,363
