人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析

摘要：

目的 表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性.方法 以商品化的PRLcDNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒pET25中,构建重组原核表达质粒PRL-pET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9d后,分析稳定性.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量约30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15％,纯度大于90％,总蛋白浓度为0.796 mg/ml.重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9d,浓度变化较小,偏差在10％以内.结论 获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备.

关键词：PRL、原核细胞、基因表达、纯化、抗原性、稳定性

所属期刊栏目：28

分类号：Q575+.6;R392-33(激素)

在线出版日期：2015-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：352-355