牛产气荚膜梭菌α-ε毒素基因的融合表达及其纯化

摘要：

目的 融合表达产气荚膜梭菌α毒素基因和ε毒素基因的融合基因α-ε,并进行纯化.方法 利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌C57-8株基因组DNA中扩增出α毒素基因的部分基因片段,插入到质粒pET28a-ε上,构建含α-ε融合毒素基因的表达质粒pET28a-α-ε,转化至E coli BL21(DE3)plysS感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组质粒pET28a-α-ε经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,与预期的基因序列重合率为99％.表达的重组蛋白相对分子质量约78 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的22.7％,纯度为91.2％,可与小鼠产气荚膜梭菌多抗血清特异性结合,具有良好的反应原性.结论 成功构建了重组质粒pET28a-α-ε,并在E coli BL21(DE3)plysS中表达了重组α-ε融合蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防牛肠毒血症基因工程亚单位疫苗的候选抗原.

关键词：产气荚膜梭菌、α毒素基因、ε毒素基因、融合表达、纯化

所属期刊栏目：28

分类号：S855.1+2;Q786(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2015-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：261-265