应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌
目的 应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1-150aa(GapC1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础.方法 根据GenBank中登录的gapC基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒pKD3、pQE30/lpp-ompA-gapC为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含pKD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用pKD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除pKD46质粒的重组菌(HB101LOG).对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测.结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白GapC1-150aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律.结论 应用RED系统成功构建了能展示链球菌GapC1-150aa的大肠埃希菌重组菌株.
链球菌、GapC蛋白、大肠埃希菌、RED同源重组
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Q784(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金31072120;国家科技支撑现代奶业发展科技工程项目2012BAD12B03支持.
2015-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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