致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的融合表达及其靶向性验证

摘要：

目的 构建致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的表达载体,表达、纯化融合蛋白,并对其靶向性进行初步验证.方法 根据大肠埃希菌密码子偏好性,对Nts-1天然基因序列进行同义突变,并在Nts-1序列两端分别插入一个半胱氨酸使其环化后,克隆至pET14b-EGFP载体中EGFP序列的C-末端,构建重组原核表达质粒pET14b-EGFP-Nts-1,转化大肠埃希菌,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白his-EGFP-Nts-1经纯化和SDS-PAGE鉴定后,用LPS致炎人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外验证其在细胞表面的亲和力.结果 成功构建了pET-14b-EGFP-Nts-1表达载体,纯化后的融合蛋白相对分子质量约32 000,纯度达95％以上.融合蛋白his-EGFP-Nts-1可特异性地靶向于致炎血管内皮细胞表面,其亲和力是由短肽Nts-1介导的.结论 成功表达了融合蛋白his-EGFP-Nts-1,并初步验证了其对致炎血管内皮细胞的亲和力,为其生物化学活性及功能的研究奠定了基础.

关键词：Nts-1、血管内皮细胞、靶向肽、表达载体

所属期刊栏目：28

分类号：R543;Q782(心脏、血管（循环系）疾病)

在线出版日期：2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：21-25,29