脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中A群游离多糖含量测定方法的建立
目的 建立脑膜炎球菌结合疫苗中A群游离多糖含量的定量检测方法,并进行验证.方法 采用高效阴离子色谱-电导法(high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection,HPAEC-CD),分析柱:Ion-PacTMAS11 Analytical(4 mm×250 mm),22 mmol/L NaOH流洗,流速为1 ml/min,25μl自动进样,电导检测.筛选样品的氧化反应最佳温度、双氧水浓度及干烤时间,确定HPAEC-CD的检测限和定量限,并进行专属性、准确性及精密度验证.应用建立的方法检测3批多糖蛋白结合物原液A-破伤风类毒素(A-tetanus toxoid,A-TT)多糖及游离多糖含量,并与《中国药典》三部(2010版)附录ⅦA磷测定法中的传统比色法进行比较;同时检测3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖及游离多糖含量.结果 确定样品的氧化条件为:100 μl/ml H2O2,220℃干烤90 min.磷标准品在0.1～1μg/ml范围内,峰面积和浓度线性关系良好(r=0.999 877);TT、C-TT、W-TT及Y-TT对测定无干扰;该方法的检测限为0.007 μg/ml,定量限为0.024 μg/ml;A群脑膜炎球菌多糖原液的加样回收率在97.56％ ～ 102.95％之间;重复性及不同操作者间的精密度试验结果RSD均小于5％.A-TT的多糖含量及游离多糖含量与传统比色法测定结果差异较小;3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖含量均符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》及《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》要求,游离多糖含量分别为24.31％、23.04％、24.44％和19.07％、17.80％、19.46％.结论 采用H2O2氧化处理,HPAEC-CD检测,除了能对脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中微量A群多糖含量进行定量检测外,还能够进行游离多糖含量的检测.该方法灵敏度和精密度良好,操作简单、安全,对操作者及环境提供了保护.
过氧化氢、高效阴离子色谱-电导法、脑膜炎奈瑟菌、结合疫苗、多糖、含量测定
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R378.1+5;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
重大新药创制科技重大专项2010ZX09401-303-308.
2015-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1595-1600
