抗人肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体在CHO细胞中的表达及鉴定

摘要：

目的 在CHO细胞中表达抗人肿瘤坏死因子(human tumor necrosis factor-alpha,hTNF-α)人源单克隆抗体,并对抗体纯化后进行鉴定.方法 将含有编码抗hTNF-α人源单克隆抗体轻、重链可变区及恒定区基因的真核表达质粒pHL,利用脂质体LipofectamineTM 2000转染CHODG44细胞,经氨甲喋呤(methotrexate,MTX)加压筛选和单克隆筛选,获得分泌表达抗hTNF-α人源单克隆抗体的CHO细胞株.应用MabSelectSuRe和Capto adhere两步层析纯化抗体后,分析抗体的纯度、N-末端序列、结合动力学平衡常数及中和活性.结果 经两步层析后,抗hTNF-α人源单抗经SDS-PAGE分析,可见纯度较好的抗体重链、轻链和完整抗体条带,SEC-HPLC纯度为98.79％;抗体的轻、重链N-末端氨基酸序列与预期一致,其结合动力学平衡常数(KD)为1.34×10-10 M,能拮抗TNF-α对L929细胞的杀伤作用,对TNF-α细胞毒的中和率达90％左右.结论 在CHO细胞中成功表达了具有较好中和活性的抗hTNF-α人源单克隆抗体.

关键词：肿瘤坏死因子-α、单克隆抗体、CHO细胞

所属期刊栏目：27

分类号：R979.1;R392-3(药品)

在线出版日期：2015-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1547-1550