直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度条件的优化及验证

摘要：

目的 对直接免疫荧光法检测狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的条件进行优化及验证.方法 考察直接免疫荧光法中细胞不同接种方式(分步接种法、一步接种法)、病毒不同培养温度(34、37℃)及培养时间(6、12、24、48、72、96 h)对狂犬病病毒滴度的影响;对优化的方法进行试验间精密性和特异性验证,并与小鼠脑内滴定法的检测结果进行比较.结果 选择一步接种法作为直接免疫荧光法的细胞接种方式;34℃作为病毒培养温度;病毒培养至96 h时进行染色,判定实验结果;病毒培养至第3天时进行荧光灶计数,计算病毒液中病毒的数量.两名操作人员12次检测结果的变异系数仅为0.05％;用该方法检测不同病毒,仅狂犬病病毒组出现特异性荧光,而犬瘟热病毒和犬细小病毒组未观察到荧光灶.采用直接免疫荧光法和小鼠脑内滴定法检测狂犬病病毒样品的病毒滴度结果差异无统计学意义(P＞0.05),具有较好的一致性.结论 优化的直接免疫荧光法精密性良好,特异性强,操作简便,检测周期短,可用于狂犬病病毒滴度的定量检测.

关键词：狂犬病病毒、直接免疫荧光法、病毒滴度

所属期刊栏目：27

分类号：R373.9;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技部十二五重大科技专项2012ZX10001-009.

在线出版日期：2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1477-1480