牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证
目的 建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证.方法 建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较.结果 优化的试验条件为:Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0× 105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12h以上,但不超过24 h.2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高.分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒.结论 建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测.
牛血清、牛病毒、直接免疫荧光法
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R392-33
2015-01-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
1468-1472