腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法,并进行验证.方法 针对腮腺炎减毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针;以05008批腮腺炎减毒活疫苗S79株成品作为参考品,将参考品或供试品稀释后,接种于长成单层的Vero细胞中,采用低渗合并冻融法将细胞破碎,吸取上清,进行荧光定量RT-PCR.优化病毒感染时间,并对该方法的特异性、精密性及准确性进行验证.结果 病毒感染的最佳时间为18h;建立的荧光定量RT-PCR法只对腮腺炎减毒活疫苗具有特异性扩增,对灭活的腮腺炎减毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、风疹病毒和Vero细胞均无扩增曲线出现;该方法检测4个浓度(1、1∶5、1∶52、1∶53)样品6组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均＜5％,不同操作人员于不同日期检测4个浓度(1、1∶5、1∶52、1∶53)样品的标准曲线回归方程R2均大于0.97,RSD均＜5％;该方法与细胞病变法测得的11批腮腺炎减毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 LgCCID50/ml,两组数据差异无统计学意义(P＞0.05).结论 建立的荧光定量PCR法检测腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度特异性较强,精密性和准确性良好,且快速方便,可应用于企业生产过程中的内部质控.

关键词：腮腺炎减毒活疫苗S79株、荧光定量逆转录-聚合酶链反应、病毒感染性滴度

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分类号：R373.1+6;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1463-1467,1472