TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA方法的适用性验证及应用
目的 对TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行适用性验证及应用.方法 对TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,并应用该方法检测3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液、纯化液和原液中Vero细胞残余DNA含量,计算Vero细胞残余DNA去除率.结果 TaqMan MGB探针实时定量PCR能够特异性扩增Vero细胞基因组DNA长串连重复序列;DNA浓度在10-1 ～ 10-6 ng/μl范围内标准曲线线性良好,相关系数为0.996,扩增效率为93.54％;检测灵敏度为10-6 ng/μl,高于斑点杂交法;检测高(10-2 ng/μl)、中(10-4 ng/μl)、低(10-6 ng/μl)浓度阳性对照DNA模板的试验内变异系数(CV)为0.145％～3.110％,试验间CV为0.624％ ～2.359％;检测不同浓度阳性对照DNA的回收率在101.5％～109.4％之间,均在定量方法可接受的回收率范围内;在斑点杂交检测灵敏度范围内,同一样品采用TaqMan MGB探针实时定量PCR法与斑点杂交法半定量检测的结果吻合.3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液纯化后可有效去除Vero细胞残余DNA,总去除率约为100％.结论 TaqMan探针实时定量PCR法特异性、精密性、准确性良好,灵敏度高,可作为斑点杂交法的替代方法,用于实验室内部的质量控制.
TaqMan MGB探针实时定量PCR、斑点杂交、Vero细胞、残余DNA
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Q789;R392-33(基因工程（遗传工程）)
科技部863计划2012AA02A401;国药新产品基金2013SW22;重大新药创制2013ZX09402302;北京市科委基金资助Z131100006513007.
2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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