抗卵巢癌相关抗原CA125单抗及其磁酶诊断试剂的制备
目的 制备卵巢癌相关抗原CA 125 (cancer antigen 125)磁酶检测试剂,并进行验证及初步应用.方法 应用CA125抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,筛选效价高、稳定性分泌抗体的杂交瘤细胞株后,接种小鼠腹腔,收集腹水,制备抗CA125单抗,并对其亚型、特异性、相对亲和力、抗原结合位点及抗原决定簇进行鉴定.通优化反应条件制备CA125抗原磁酶检测试剂,并进行验证后,将其应用于50份女性健康体检者及100份卵巢癌患者血清的检测.结果 共获得3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4B6、2G10、1C2;1C2、4B6和2G10单抗的抗体亚型分别为IgG2a、IgG1和IgG1,轻链均为κ链,相对亲和力依次为2G10＞ 4B6＞ 1C2,与AFP、CA50、CEA、CA199、CRP、CA242和小牛血清未发生交叉反应,1C2单抗识别位点与2G10和4B6不同,且3株单抗的抗原决定簇均在CA125蛋白部分上.确定该磁酶检测的反应条件为:包被抗体按100 μg/ml,37℃包被1 h;20％小牛血清37℃封闭1h或4℃封闭过夜;酶标抗体最佳反应时间为45 min.当CA125浓度在10～ 500 U/ml时,与对应的A450值线性关系良好,R2=0.992;该检测试剂最低检测极限约10 U/ml,灵敏度高;与人血清白蛋白、小牛血清、CA50、CEA、AFP、CRP、CA199和CA242均未发生反应,特异性高;于37℃放置4d的CA125 A450值与2～8℃相比,差异无统计学意义(P＜0.05);批内及批间变异系数均＜10％,重复性较好;高、中、低3个浓度的CA125抗原的回收率在94.45％～ 105.21％之间,准确性高.50份健康体检者血清中CA125阳性率为4％,100份卵巢癌患者血清中CA125阳性率为88％.结论 已成功制备了卵巢癌相关抗原CA125磁酶检测试剂,该试剂具有应用于卵巢癌患者的诊断价值.
CA125抗原、单克隆抗体、磁珠、诊断
27
R737.31;R392-33(肿瘤学)
2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1426-1432
