柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒的制备及其免疫原性
目的 应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),通过条件优化,提高VLP的表达量,纯化后检测其免疫原性.方法 对CVA16结构蛋白基因P1及蛋白酶基因3CD进行密码子优化,插入启动子P10改造为CMV的重组杆状病毒表达载体pFastBac Dual-CMV中,获得重组穿梭质粒pFastBac Dual-CMV-P1-3CD,转化DH10 BacTM Competent Cells,提取重组杆粒Bacmid-CMV-P1-3CD,转染Sf9细胞,组装成重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD,并进行扩增,采用间接免疫荧光法、Western blot法及透射电镜观察对表达产物进行初步鉴定.对重组CVA16 VLP的表达条件(病毒接种MOI值、感染时间及细胞培养方式)进行优化后,通过20％蔗糖垫层及氯化铯连续密度梯度离心法纯化CVA 16VLP,并通过腹部皮下注射免疫ICR小鼠3次,采用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度.结果 重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD经PCR及测序鉴定证实组装成功;重组CVA16 VLP在Sf9细胞中成功表达,优化的表达条件为:重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD按MOI=5接种,Sf9细胞采用悬浮培养方式悬浮培养96 h,收集细胞及培养上清;纯化的CVA16 VLP纯度可达90％以上,针对VP2的单克隆抗体能与VP0及VP2发生特异性反应,电镜下可见大量形态规则的类球形VLP,直径约为27 nm;纯化的CVA16 VLP免疫ICR小鼠后,诱导机体产生的特异性血清IgG滴度可达1∶105,中和抗体滴度达1∶358.结论 应用杆状病毒表达系统成功表达了CVA16的P1和3CD蛋白,并组装形成完整的VLP;通过质粒启动子的改造及表达条件的优化,有效提高了CVA16 VLP的表达量;纯化的CVA16 VLP可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,为CVA16亚单位疫苗的研究提供了参考.
手足口病、柯萨奇病毒A组16型、病毒样颗粒、免疫原性
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R373.2+3;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项病毒性传染病病原谱流行规律及变异研究2013ZX10004202,2012ZX10004201-003.
2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1361-1368,1374
