乙型脑炎病毒的生物反应器培养及其灭活和纯化
目的 利用NBS 14 L篮式生物反应器大规模培养乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),并对病毒收获液进行灭活和纯化,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供参考.方法 用NBS 14 L篮式生物反应器,以片状载体FibralCel DISK I为载体,进行Vero细胞高密度培养,分别按0.0l、0.1和0.3 MOI接种JEV(P3V2)毒种,灌流培养,收获3批病毒液,检测病毒滴度;分别使用不同浓度的甲醛(100、200、400 ng/ml)于4、25℃和不同浓度的β-丙内酯(β-丙内酯∶病毒液分别为1∶2000、1∶4000、1∶8000)于4℃对病毒收获液进行灭活,取灭活后的病毒液,接种昆明小鼠,验证病毒灭活效果;用截留相对分子质量为10万的超滤器对病毒收获液进行超滤浓缩,用Sepharose 4FF层析柱对病毒浓缩液进行层析纯化.结果 共培养3批Vero细胞,平台期密度约为1.6× 107个/ml.3批病毒收获液的滴度分别为8.4、8.1和7.9 lgLD50/ml.以甲醛为灭活剂,作用浓度为200 ng/ml,温度为4℃时,作用7d可完全灭活病毒,且免疫原性合格;以β-丙内酯为灭活剂,作用浓度为1∶4000,温度为4℃时,作用12h可完全灭活病毒,且免疫原性合格.3批病毒浓缩液病毒液经Sepharose 4FF层析柱层析纯化后,蛋白去除率达99％以上,抗原回收率在95％以上,Vero细胞蛋白质残留量和DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)的相关规定.结论 成功实现了JEV的大规模生物反应器培养,层析纯化后病毒的抗原回收率较高,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供了参考.
乙型脑炎病毒、灭活疫苗、Vero细胞、生物反应器、柱层析
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R373.3+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1309-1312
