甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及初步应用
目的 建立甲型副伤寒沙门菌抗体间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以甲型副伤寒沙门菌体脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为包被抗原,HRP标记的羊抗小鼠IgG作为二抗,TMB作为显色剂,建立检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法,优化间接ELISA法的试验条件,并进行验证.取2批甲型副伤寒结合物原液,分别经NIH小鼠大腿内侧皮下各免疫3次,间隔14 d,第2、3次免疫后7d采血,按建立的间接ELISA法检测血清中甲型副伤寒沙门菌抗体水平,计算抗体阳转率.结果 抗原的最适包被浓度为2 μg/ml,血清最适稀释倍数为1∶80,酶标二抗的最适稀释比例为1∶6000;包被抗原与血清的最适反应时间为2h,血清与酶标二抗的最适反应时间为lh,封闭液室温下最适封闭时间为2h.用建立的方法检测20只小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清,血清稀释500倍阳性检出率仍不低于80％;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清的试验内和试验间变异系数分别为4.6％和7.5％,检测阴性血清样品的试验内和试验间变异系数分别为9.4％和13.9％,均低于15％;检测小鼠甲型副伤寒沙门菌全菌体超免血清和甲型副伤寒结合物原液免疫阳性血清的结果为阳性,检测乙型副伤寒结合物小鼠免疫阳性血清、伤寒Vi多糖结合物小鼠免疫阳性血清及阴性血清的结果为阴性.两批甲型副伤寒结合物原液免疫小鼠在第2针免疫后7d的血清阳转率均为10％,第3针免疫后7d的血清阳转率均为100％.结论 建立的检测甲型副伤寒沙门菌抗体的间接ELISA法灵敏度较高,精密性良好,特异性较强,可用于评价甲型副伤寒结合疫苗的免疫原性.
甲型副伤寒沙门菌、抗体、酶联免疫吸附测定、脂多糖
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R378.2+4;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
云南省科技计划项目2014AE009.
2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1299-1303
