A群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离糖含量测定方法的建立及其验证
目的 建立A群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离糖含量测定的方法,并进行验证.方法 采用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)法,分别取l ml 10、50、100、150、200、250、294 μg/ml载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,兀T),与100μl 1％ DOC溶液(pH 7.3)混匀,离心收集上清,检测蛋白含量,确定DOC沉淀载体蛋白范围;用不同离子强度梯度的缓冲液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L氯化钠)稀释游离多糖与载体蛋白混合物溶液,收集上清,检测多糖含量,确定游离多糖分离条件;以1％ DOC溶液作为稀释剂绘制参考品磷含量测定标准曲线,确定DOC存在对磷含量测定结果的影响,建立DOC沉淀蛋白结合磷含量测定方法测定A群脑膜炎球菌多糖结合物中游离糖含量的方法,并对建立的方法进行精密度、准确性及重复性验证.结果 DOC沉淀载体蛋白浓度控制在250 μg/ml以下;将0.8 mol/L氯化钠溶液作为A群脑膜炎球菌多糖结合物中游离糖含量测定所需最佳稀释液;以1％ DOC溶液作为稀释剂绘制的磷含量标准曲线线性范围在0～4μg/ml时,r2为0.999 9.A群脑膜炎球菌多糖结合物原液及游离糖对照品与载体蛋白混合物沉淀中蛋白回收率在95％～110％之间;游离糖添加试验回收率均在95％以上;4批A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物游离糖含量平均值均在规定范围内.结论 建立的DOC沉淀蛋白结合磷含量测定方法可有效分离结合物与游离多糖,并准确测定结合物含量.
A群脑膜炎球菌多糖结合物、游离糖、含量测定
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R378.1+5;O656.33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家科技支撑计划课题2008BAI66B01.
2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1295-1298,1303
