产气荚膜梭菌α毒素的原核表达及纯化

摘要：

目的 克隆产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perqingens alpha-toxin,CPA)全基因,在大肠埃希菌(E.coli)中表达并纯化α毒素.方法 设计并合成CPA的全基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-CPA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,并对重组蛋白进行纯化.结果 双酶切和测序鉴定结果表明,CPA基因以正确的阅读框架克隆入pET-28a载体中;表达的重组蛋白相对分子质量约为43 000,主要以可溶性形式表达,最佳培养基为TB培养基,最佳诱导温度为37 ℃,诱导时间为3h;纯化的重组蛋白纯度达95％以上,浓度为0.663 mg/ml,收率为5 mg/g湿菌.结论 成功在E.coli中表达了CPA,纯化后的CPA纯度较高,为进一步研究其结构、功能、致病机制及制备抗α毒素人源单链抗体奠定了基础.

关键词：产气荚膜梭菌α毒素、基因克隆、原核细胞、基因表达、纯化

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分类号：R378.8;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1258-1262