牛乳铁蛋白肽在酿酒酵母中的分泌表达及其活性
目的 在酿酒酵母中分泌表达牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferricin,LfcinB),并检测其活性.方法 根据LfcinB的氨基酸序列,按照酿酒酵母密码子偏好性设计LfcinB基因序列,人工合成LfcinB基因,扩增后插入质粒pYES2-α中,构建重组表达质粒pYES2-α-LfcinB,转化至酿酒酵母INVSc1中,半乳糖诱导表达.采用抗生素微生物效价测定法中的管碟法一剂量法检测表达的LfcinB对大肠埃希菌DH5α和枯草杆菌的抑菌活性.对重组酵母菌的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度进行优化,并检测重组LfcinB的稳定性.结果 重组表达质粒pYES2-α-LfcinB经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌诱导表达产物可见相对分子质量分别为5 164和4 355的特异蛋白条带,每升工程菌发酵液中目的蛋白含量约为2.878 5 mg;表达的重组LfcinB对大肠埃希菌DH5α和枯草杆菌均有明显的抑菌活性;在诱导温度为26℃、半乳糖浓度为3％的条件下诱导96 h时,LfcinB的抑菌活性最高;重组LfcinB具有热稳定性,且二硫键的存在对其抑菌活性无影响.结论 已成功在酿酒酵母中分泌表达了具有活性的LfcinB,为进一步研究LfcinB的生物功能及其应用奠定了基础.
牛乳铁蛋白肽、酿酒酵母、分泌表达、抗菌活性
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Q786(基因工程（遗传工程）)
安徽省自然科学基金1408085MC50;安徽省高校自然科学自然科学研究重点项目KJ2010A025.
2014-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1132-1137
