伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达及其纯化
目的 原核表达并纯化伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Trichinella pseudospiralis serine protease inhibitor,Tpserpin)基因,并鉴定其抗原性.方法 从伪旋毛虫肌幼虫提取总RNA,RT-PCR扩增Tp-serpin基因,插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,转化大肠埃希菌(E coli)Rosetta gami(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot 鉴定反应原性.结果 重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,与GenBank中登录的Tp-serpin基因相似性达99％.表达的重组Tp-serpin蛋白相对分子量约43 000,表达量约占菌体总蛋白的40％,主要以可溶性形式存在;纯化后的重组Tp-serpin蛋白纯度达95％以上,可被伪旋毛虫感染60 d的猪血清特异性识别,具有较好的反应原性.结论 成功构建了重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,并在E.coli Rosetta gami(DE3)中表达了重组蛋白,为旋毛虫病的血清学诊断候选抗原的研制及开发提供了科学依据,也为阐明serpin在伪旋毛虫入侵时期调节宿主免疫反应的作用奠定了基础.
伪旋毛虫、丝氨酸蛋白酶抑制剂、原核细胞、基因表达、纯化
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R383.1;R392-33(医学寄生虫学)
国家自然科学基金NSFC81201302.
2014-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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