诺如病毒衣壳蛋白在293T细胞中的表达及纯化
目的 在293T细胞中表达诺如病毒衣壳蛋白,并进行纯化.方法 将合成的人诺如病毒GⅡ.4悉尼大流行株VP1基因(全长1 623 bp)插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒,测序验证无误后,通过磷酸钙共沉淀法将质粒转染至293T细胞中,收获转染细胞上清,进行Western blot鉴定.转染3～5d后,收获细胞上清,经氯化铯平衡密度梯度离心纯化衣壳蛋白,收集各组分,离心沉淀病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),PBS重悬后,SDS-PAGE分析目的蛋白的纯度;电镜观察VLPs;BCA法测定蛋白含量.结果 Western blot分析显示,重组表达质粒转染的293T细胞上清可见特异的蛋白条带.收获的细胞培养上清经氯化铯平衡密度梯度离心后,可见3个明显条带;10％SDS-PAGE分析显示,衣壳蛋白主要位于第3个条带,纯度达95％以上;目的蛋白有2个条带,相对分子质量分别为59 000和56 000;收集的3个组分经电镜观察可见,表达的诺如病毒衣壳蛋白主要位于第3个条带,且组装成了VLPs,颗粒大小约为38 nm;每升培养基可获得约500μg VLPs.结论 成功在293T细胞中表达了诺如病毒衣壳蛋白,该衣壳蛋白成功组装成了VLPs.本实验建立了一种小规模制备诺如病毒VLPs的新方法.
诺如病毒、病毒样颗粒、磷酸钙沉淀
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R373.2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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