金黄色葡萄球菌表面蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
目的 在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体.方法 筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa,分别转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化.以纯化后的FnBPA-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以FnBPA-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性.结果 经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa构建正确;在相对分子质量约42 000和19 000处,分别可见FnBPA-GST和FnBPA-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的30％和20％,均以可溶性形式表达,纯度均在90％以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清.结论 2种标签的融合蛋白均具有较好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了基础.
金黄色葡萄球菌、纤连蛋白结合蛋白、多克隆抗体
27
R378.1+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家传染病重大专项2013ZX10004804-003;全军十二五重大项目AWS11C001.
2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
890-894
