牛Ⅱ型链球菌van B2基因真核表达质粒的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达

摘要：

目的 构建牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2基因真核表达质粒,并在宫颈癌HeLa细胞中进行表达.方法 以牛Ⅱ型链球菌基因组为模板,采用PCR法扩增van B2基因,克隆至真核表达载体pVAX-1中,构建重组表达质粒pVAX-1-van B2.采用FuGENE HD Transfection Reagent试剂盒将重组表达质粒转染HeLa细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测转染细胞中van B2基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Western blot法检测转染细胞中van B2蛋白的表达.结果 重组表达质粒pVAX-1-van B2经双酶切及测序鉴定构建正确;重组表达质粒转染HeLa细胞48 h后,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR及Western blot分析分别可见570 bp及相对分子质量20 900的目的条带.结论 成功构建了牛Ⅱ型链球菌van B2基因的真核重组表达质粒,并在HeLa细胞中成功表达.本实验为进一步研究牛Ⅱ型链球菌对抗生素的耐药性机制及其与van B2基因的相关性奠定了基础.

关键词：牛Ⅱ型链球菌、van B2基因、真核细胞、基因表达、HeLa细胞

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分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目NJZY12119;内蒙古自然科学基金资助项目2013MS0403

在线出版日期：2014-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：529-532