融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA的原核表达、纯化及其生物学活性
目的 原核表达、纯化融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA,并检测其生物学活性.方法 以pET32a(+)CTP-OD-HA为模板,PCR扩增OD序列中的第1-87 bp和第190-216 bp序列,并通过重叠PCR连接成为新序列,命名为OD1,克隆至pET32a(+)载体,构建原核表达质粒pET32a(+)CTP-OD 1-HA;再分别以pET32a(+)CTP-OD-HA和pET32a(+)CTP-OD1-HA质粒为模板,PCR扩增CTP-OD-HA和CTP-OD 1-HA片段,分别克隆至表达载体pCOLD-TF-DNA,构建质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD1-HA,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA融合蛋白;表达的融合蛋白经镍离子亲和层析纯化和脱盐浓缩后,采用MTT法和DAPI染色检测两种融合蛋白对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.结果 重组原核表达质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD 1-HA经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD 1-HA融合蛋白相对分子质量分别约为67 000和63 000,主要为可溶性表达,表达量分别占总菌体蛋白的35％和20％,脱盐浓缩后,纯度分别约为98％和95％,均可与鼠抗HA单克隆抗体特异性结合;TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA对K562细胞的增殖抑制率分别为34％和31％,与PBS对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.001);TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD 1-HA处理的K562细胞胞核均具有细胞凋亡的典型特征.结论 原核表达并纯化了TF-CTP-OD1-HA融合蛋白,该蛋白具有与TF-CTP-OD-HA相似的生物学活性,为今后开发治疗慢性粒细胞白血病的小分子多肽药物提供了新的策略.
慢性粒细胞白血病、寡聚化结构域、融合蛋白、原核细胞、基因表达、纯化、生物学活性
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Q786(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金30670901,30871102
2014-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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