中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立
目的 建立中蜂囊状幼虫病病毒(chinese sacbrood,CSBV)依赖解旋酶扩增(helicase-dependent amplification,HDA)检测方法,并对该方法进行优化及验证.方法 提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫RNA,以其为模板进行HDA,对建立的HDA的引物浓度(原始浓度为50μmol/L,进行10、20、40、80、160、240、320倍稀释)、反应温度(60、65及70℃)及时间(60、90及120 min)进行优化,并对优化的方法进行特异性、敏感性及稳定性验证.经电镜观察、RT-PCR及优化的HDA法对37份临床样品进行检测.结果 HDA最佳引物浓度、反应温度及时间分别为5μmol/L、65℃及90 min;CSBV与健康幼虫、蜜蜂急性麻痹病毒(acute bee paralysis virus,ABPV)、蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus,CBPV)、黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)和残翅病毒(deformed wing virus,DWV) cDNA均无交叉反应,HDA的最低检出限为10-2 ng,检测试剂保存12个月后,仍可扩增出目的条带;37份临床样品中,有6份样品的RT-PCR和HDA结果为阳性,但电镜观察仪有4份为阳性.结论 建立了CSBV HDA检测方法,该方法具有较高的敏感性、特异性及稳定性,为检测其他蜂病毒及快速鉴定其他动物病毒提供了参考.
中蜂囊状幼虫病病毒、依赖解旋酶扩增
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R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金31372435;辽宁省人力资源和社会保障厅资助2011921021
2014-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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