人内源性博尔纳样核蛋白-1的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达人内源性博尔纳样核蛋白-1(endogenous Borna-like N element-1,EBLN-1),并进行纯化及鉴定.方法 以人工合成的EBLN-1基因为模板,PCR扩增EBLN-1基因,克隆至载体pET-41a中,构建重组表达质粒pET-41a-EBLN-1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)和Rosetta中,分别于18℃和37℃下进行IPTG诱导表达.采用包涵体稀释复性法对表达蛋白进行复性,经His亲和层析纯化后,SDS-GAGE和Western blot法鉴定纯化产物.结果 重组表达质粒pET-41a-EBLN-1经菌落PCR及测序鉴定构建正确.重组表达蛋白相对分子质量约48 000,以包涵体形式表达.在大肠埃希菌Rosetta中37℃诱导时表达量最高,占菌体总蛋白的30％以上,纯化后蛋白纯度可达90％,可与HRP标记的His探针特异性结合.结论 成功表达并纯化了重组EBLN-1蛋白,为后续深入研究EBLN-1在人体中的生理作用及其与精神疾病的相关性奠定了基础.

关键词：人内源性博尔纳样核蛋白-1、原核细胞、基因表达、纯化

所属期刊栏目：27

分类号：R373.9;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划,2009CB918300

在线出版日期：2014-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：172-176